有關(guān)紡織品抗菌性能評(píng)價(jià)方法的研究，國(guó)外已開(kāi)展了多年，并陸續(xù)建立了一些具有代表性的、相對(duì)穩(wěn)定的、可在多個(gè)實(shí)驗(yàn)室重復(fù)進(jìn)行的測(cè)定方法。具體見(jiàn)表l和表2。
這些方法中大多數(shù)都存在一定的局限性，各種方法的測(cè)定結(jié)果之間沒(méi)有嚴(yán)格的可比性。而且各自的優(yōu)缺點(diǎn)十分明顯，以下是對(duì)幾種常用抗茵測(cè)試方法的介紹：
一、 AATCC-90試驗(yàn)法
又稱暈圈試驗(yàn)法，是用于抗菌劑篩選的抗菌效力快速定性方法，原理是：在瓊脂培養(yǎng)基上接種試驗(yàn)菌，再緊貼試樣，于37℃下培養(yǎng)24h后，用放大鏡觀察菌類繁殖情況和試樣周圍無(wú)菌區(qū)的暈圈大小，與對(duì)照樣的試驗(yàn)情況比較。此法一次能處理大量的試樣，操作較簡(jiǎn)單，時(shí)間短。但也存在一些問(wèn)題，如雖然規(guī)定了在一定時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)試驗(yàn)菌液，但是菌濃表l 抗細(xì)菌效力測(cè)定方法
試驗(yàn)方法名稱 | 定性或定量 | 評(píng)價(jià)依據(jù) |
Halo法 | AATCC-90 | 定性 | 阻止帶寬度 |
改良AATCC-90(噴霧法) | 定性 | 顯色的程度 |
改良AATCC-90(比色法) | 定量 | 顯色的程度 |
Pewocci法 | 定量 | 阻止帶 |
菌數(shù)減少法 | 浸漬法 | AATCC-l00 | 定量 | 菌減少率 |
改良AATCC-l00 | 定量 | 菌減少率 |
細(xì)菌增殖抑制法 | 定量 | 增殖抑制效果 |
菌數(shù)測(cè)定法 | 定量 | 增減值差 |
Latief法 | 定最 | 菌減少率 |
Isquith法 | 定量 | 菌減少率 |
Majors法 | 半定量 | 滴定值 |
新瓊脂平板法 | 定量 | 殺菌抑菌活性 |
振蕩法 | 振蕩瓶法 | 定量 | 菌減少率 |
改良振蕩瓶法 | 定量 | 菌減少率 |
其它方法 | Quinn法 | 定量 | 菌減少率 |
平行劃線法 | 定性 | 阻止帶 |
AATCC-147 | 半定量 | 阻止帶寬度 |
表2 抗霉菌效力測(cè)定方法
試驗(yàn)法 | 定性或定量 | 評(píng)價(jià)依據(jù) |
J1SZ2911抗霉性法 | 定性 | 菌發(fā)育情況 |
AATCC-30 | 定性 | 強(qiáng)度殘留率 |
AATCC-90 | 定性 | 阻止帶寬度 |
AATCC-147 | 半定量 | 阻止帶寬度 |
平行劃線法 | 定性 | 阻止帶 |
增濕瓶法 | 定性 | 菌生長(zhǎng)情況 |
真菌生長(zhǎng)抑制法 | 半定量 | 對(duì)菌生長(zhǎng)抑制 |
真菌生長(zhǎng)繁殖阻止效果法 | 半定量 | 菌生長(zhǎng)程度 |
真菌定量評(píng)價(jià)法(濾紙接觸法) | 半定量 | 菌生長(zhǎng)程度 |
白癬菌生長(zhǎng)繁殖阻止效果法 | 定量 | 菌減少率 |
卻沒(méi)有明確的規(guī)定。另外，阻止帶的寬度代表的是擴(kuò)散性和抗菌效力，對(duì)于與標(biāo)準(zhǔn)織物比較是有意義的，但不能作為抗菌活力的定量評(píng)定。
AATCC-90試驗(yàn)法改良之一(噴霧法)是在培養(yǎng)后的試樣噴灑一定量TNT試劑，肉眼觀察試樣上菌的生長(zhǎng)情況。其發(fā)色原理為TNT試劑因試驗(yàn)菌的琥珀酸脫氫酶的作用被還原，生成不溶紅色色素而顯紅色，從而達(dá)到判定抗菌性的目的。該種方法的優(yōu)點(diǎn)就是無(wú)論試樣是否有抑菌圈形成，只要平板上有細(xì)菌生長(zhǎng)，就會(huì)顯出紅色。
AATCC-90試驗(yàn)法改良之二(比色法)是在培養(yǎng)后試樣上的菌洗出液中加入一定量的TNT試劑使發(fā)色，l5min后用分光光度計(jì)測(cè)定525nm處的吸光度，來(lái)求出活菌個(gè)數(shù)。但是以上兩方法不適用于無(wú)琥珀酸脫氫酶的試驗(yàn)菌。
二、 AATCC-l00試驗(yàn)法
AATCC-l00是一種容量定量分析方法，適用于抗菌紡織品抗菌率的評(píng)價(jià)。
該法于1961年由AATCC委員會(huì)提出，1965，1981，1988，1993年作了修訂。是目前國(guó)外使用較廣泛的抗菌性測(cè)試法之一。
該法原理為：在待測(cè)試樣和對(duì)照試樣上接種測(cè)試菌，分別加入一定量中和液，強(qiáng)烈振蕩將菌洗出，以稀釋平板法測(cè)洗脫液中的菌濃，與對(duì)照樣相比計(jì)算織物上細(xì)菌減少的百分率。此法的缺點(diǎn)是一次試驗(yàn)的檢體不能太多，且花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)；對(duì)于非溶出型試樣，不能進(jìn)行抗菌性能評(píng)價(jià)；沒(méi)有詳細(xì)規(guī)定中和溶液的成份；而且菌液中營(yíng)養(yǎng)過(guò)于豐富，與實(shí)際穿著條件相差太大；容器太大，不易操作。
在吸收國(guó)內(nèi)外經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，對(duì)其加以改進(jìn)，形成了一套系統(tǒng)的定量測(cè)試方法體系，可以滿足不同抗菌紡織品抗菌性能測(cè)試的需要。即改良AATCC-l00，要點(diǎn)如下：
將AATCC-l00法的試樣由直徑為4.8cm的圓形 改為邊長(zhǎng)約1.8cm的正方形，將其放入3OmL或50mL帶蓋錐形瓶。用0.85%冰冷生理鹽水(0-4℃)代替AATCC肉湯稀釋接種菌。將菌種從約l08-1O9cfu/mL稀釋到l×lO5-2×lO5cfu/mL，制成接種菌液。用20mL，0.85%冰冷生理鹽水代替中和劑洗滌試樣。
用下式計(jì)算試樣的抑菌活性和殺菌活性：
抑菌率= | l8h后空白對(duì)照樣活菌數(shù)一l8h后試樣活菌數(shù) | ×100% |
l8h后空白對(duì)照樣活菌數(shù) |
殺菌率= | ‘0’時(shí)空白對(duì)照樣活菌數(shù)一l8h后試樣活菌數(shù) | ×100% |
‘0’時(shí)空白對(duì)照樣活菌數(shù) |
該種方法無(wú)論對(duì)于溶出型試樣，還是非溶出型試樣，都能進(jìn)行抗菌測(cè)試，而且培養(yǎng)基的養(yǎng)分適合織物的使用條件。
三、 振蕩瓶法
振蕩瓶法即Shake Flask法，是美國(guó)道康寧公司為克服AATCC-l00法的缺點(diǎn)而開(kāi)發(fā)的可評(píng)價(jià)非溶出型纖維制品抗菌性能的一種方法。此法為增強(qiáng)試樣與菌的接觸，將樣品投入盛有磷酸鹽緩沖液的有塞三角瓶中，移入菌液后在一定條件下強(qiáng)烈振蕩lh，取lmL試驗(yàn)液，置于培養(yǎng)基上使細(xì)菌繁殖一定時(shí)間，檢查菌落數(shù)與空白樣品比較，計(jì)算細(xì)菌減少率。
該種方法的優(yōu)點(diǎn)是可以適用于大多數(shù)試樣，像粉末狀、有毛或羽的衣服、凸凹不平的織物等都能使用，即使是水溶液中非溶出型的試樣也能評(píng)價(jià)其抗菌性能[16]。缺點(diǎn)是稀釋液缺少微生物增殖所需用的養(yǎng)分，不符合穿著條件；培養(yǎng)時(shí)間短，試驗(yàn)菌幾乎不能增殖，與日常穿衣時(shí)間相差太大；另外振蕩溫度為25℃，并非最佳培養(yǎng)溫度。
振蕩瓶法對(duì)親水性的織物測(cè)試結(jié)果較準(zhǔn)確，雖然也能測(cè)試吸水性差的織物，但準(zhǔn)確度不是很高。對(duì)完全不吸水的纖維，特別是紗線狀物或粉狀、塊狀物品，重現(xiàn)性不太理想，根據(jù)振蕩燒瓶法的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)其進(jìn)行改良，要點(diǎn)如下：將菌種從約l08-1O9cfu/mL每次10倍稀釋到1.5×lO5～3.5×lO5cfu/mL，第一次稀釋用AATCC肉湯，第二次開(kāi)始直到最后一次稀釋用磷酸鹽緩沖液，制成接種菌液。另外，在作10倍系列稀釋時(shí)，用0.85%冰冷生理鹽水代替牛肉湯。
四、 AATCC-30
AATCC-30是對(duì)紡織材料抗霉菌和抗腐爛性能的評(píng)定。確定了紡織材料抵抗霉菌和耐腐爛的性能，以評(píng)定殺菌劑對(duì)紡織材料抗菌性能的有效性[18]。分為土埋法、瓊脂平板法及濕度瓶法等兒種方法。 土埋法是指將樣品(具有一定尺寸)埋在泥中一定時(shí)間后，測(cè)定樣品的斷裂強(qiáng)度。此法是用樣品經(jīng)土埋處理后所損失的斷裂強(qiáng)度來(lái)表征其抗霉能力。
瓊脂平板法就是用來(lái)評(píng)估織物抵抗這類細(xì)菌能力的。該法是將含有培養(yǎng)基的瓊脂平板均勻滴上一定量的分散有曲霉菌孢子的水溶液，然后將經(jīng)非離子潤(rùn)濕劑處理的樣品圓片放置其上，并在樣片上均勻滴加一定量的上述水溶液，在一定的溫度下放置一段時(shí)間，最后觀察樣品上霉菌的生長(zhǎng)情況。它是用樣品圓片上的霉菌面積來(lái)進(jìn)行表征的。
濕度瓶法是經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品條懸掛置于一個(gè)有一定通風(fēng)的、盛有一定量的分散有一定數(shù)目細(xì)菌袍子的水溶液的廣口瓶中，在一定的溫度下放置一段時(shí)間。此法也是用樣品條上的霉菌面積進(jìn)行表征。
五、 AATCC-147
又稱平行劃線法，是對(duì)紡織品抗菌效力的半定量實(shí)驗(yàn)方法，可相對(duì)快速和方便地定性測(cè)試經(jīng)抗菌整理的紡織材料的抗菌性能，可用來(lái)確定具有可擴(kuò)散抗菌劑的紡織品的抗菌能力。替代了繁瑣的 AATCC-l0O。AATCC-147應(yīng)用于紡織材料的抗菌整理的評(píng)定，是對(duì)紡織材料抗菌性能的半定量分析。
AATCC-147法是將一定量的培養(yǎng)液(內(nèi)含一定數(shù)目的金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的抱子)滴加于盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板的培養(yǎng)皿中，使其在瓊脂表面形成五條平行的條紋，然后將樣品垂直放于這些培養(yǎng)液條紋上， 并輕輕擠壓，使其與瓊脂表面緊密接觸，在一定的溫度下放置一定時(shí)間。此法是用與樣品接觸的條紋周圍的抑菌區(qū)的寬度來(lái)表征織物的抗菌能力。
六、 J1SZ911抗霉性法
本方法是以試驗(yàn)菌能分解纖維素作為營(yíng)養(yǎng)源為前提的。在抗菌防臭加工纖維制品中，對(duì)合成纖維進(jìn)行抗菌試驗(yàn)時(shí)，需要進(jìn)一步研究能在試驗(yàn)布上生長(zhǎng)的細(xì)菌。
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